1. 絕大部分細胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無(wú)法計算體積的附著(zhù)在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。
2.細胞如何算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀(guān)察貼壁細胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞，這是沒(méi)有必要的。一般能移動(dòng)了，說(shuō)明細胞與培養基質(zhì)材料的附著(zhù)已經(jīng)消失了，細胞之間的附著(zhù)也已經(jīng)消失了，細胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒(méi)有呈現很廣的離散分布）。這個(gè)時(shí)候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是完全成單個(gè)細胞懸液，之后在貼壁的過(guò)程中仍然會(huì )聚集，這個(gè)是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個(gè)特性。如果和標準形態(tài)不一致，那可能是自己沒(méi)消化好導致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過(guò)程中重新聚集了。這個(gè)時(shí)候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會(huì )對你越來(lái)越不好。
3.EDTA的作用。胰酶切割ECM的一些負責粘連和附著(zhù)的蛋白，而EDTA通過(guò)螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA。
4.PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見(jiàn)的操作，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會(huì )抑制胰酶的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
