培養液是人工模擬細胞體內生長(cháng)的生存環(huán)境,對于細胞培養起著(zhù)關(guān)鍵性作用。
1. 選擇培養基沒(méi)有一定的標準,某種培養基可以適合多種細胞,某種細胞也可以在不同培養液中生長(cháng)。但是,建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞優(yōu)選的培養基??梢圆殚唴⒖嘉墨I,或在購買(mǎi)細胞株時(shí)咨詢(xún)。
2. 1640的確是非常便宜的培養基,也很好用。但是,它的緩沖力*弱,所以有時(shí)會(huì )對細胞的生長(cháng)狀態(tài)有影響,尤其是一些實(shí)驗室長(cháng)期傳代狀態(tài)不好的細胞。有條件還是用DMEM培養基。
3. 一旦在新鮮培養基中添加了血清和***時(shí),放入4度冰箱。應該在2到3周內用完它。因為,一些***和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。2-3周后就降解完了。
4. 培養基的pH值隨著(zhù)碳酸氫鈉量的增加,呈拋物線(xiàn)增長(cháng),當碳酸氫鈉加到一定量時(shí),pH變化越來(lái)越小。而培養基的滲透壓值隨著(zhù)碳酸氫鈉量的增加,呈直線(xiàn)增長(cháng),碳酸氫鈉量越大,滲培養基變成了高滲溶液,細胞會(huì )脫水萎縮滴。 (ATCC 推薦大部分細胞添加碳酸氫鈉為1.5g/L)
5. 胎牛 血清必須貯存于–20 ~ -70℃,若存放于4℃,2~3周就降解了??蓪?瓶500ml的血清,每次40~45 ml 分裝于無(wú)菌50 ml 離心管中。
6. 血清的解凍和細胞的解凍正相反:細胞是越快越好;血清是越慢越好。血清解凍步驟: -20℃或–70℃冰箱拿出來(lái),放到4℃冰箱,放**,慢慢融化。
7. 進(jìn)口的胎牛血清,一般不需要熱滅活,因為會(huì )造成沉淀物顯著(zhù)增多,且會(huì )影響血清的品質(zhì)。這些沉淀物在顯微鏡下觀(guān)察,像是“小黑點(diǎn)”,常常誤以為是血清遭受污染。