DNA螢光染色法
· 原理︰利用螢光染劑（bisbenzimide, Hoechst 33258）偵測支原體污染。此染劑會(huì )結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區域，因為支原體之DNA中A-T含量占多數（55～80%），所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經(jīng)染色后，在細胞核外與細胞周?chē)煽吹皆S多大小均一之螢光小點(diǎn)，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。
· 特點(diǎn)︰簡(jiǎn)單、經(jīng)濟與靈敏，廣泛使用，可作為例行之偵測步驟?？梢詡蓽y不易培養之支原體，例如M. hyorhinis，較直接培養法快，約一星期即可知道結果。
· 缺點(diǎn)：有時(shí)仍會(huì )有螢光背景，影響判讀。
步驟：
· 取出培養之Vero細胞，吸除培養液。于每個(gè)well中加入2 ml 1:3混合的冰醋酸/甲醇固定液，靜置10 min后，吸除固定液,用PBS洗滌三次。
· 于每個(gè)well中，加入1 ml Hoechst 33258 working solution，室溫下靜置5-10 min。
· 吸掉Hoechst 33258染液后，以無(wú)菌水洗滌3次，風(fēng)干后加入1滴的封片劑，并以蓋玻片覆蓋之。
· 以100x-400x螢光顯微鏡觀(guān)察。觀(guān)察細胞核外是否有藍色螢光小點(diǎn)或是絲狀點(diǎn)之螢光物產(chǎn)生。
結果判讀︰
若有支原體污染，在Vero細胞核外與細胞表面會(huì )出現藍色螢光小點(diǎn)或是絲狀點(diǎn)。其形狀一致，與細胞殘片染成之不規則點(diǎn)狀物不同。其螢光可維持數星期。
圖例 (A)為negative result : 螢光顯微鏡下，只觀(guān)察到Vero細胞的細胞核，測試樣品沒(méi)有支原體的污染。(為positive result : 在Vero細胞核外與細胞表面會(huì )出現藍色螢光小點(diǎn)和絲狀點(diǎn)，表示測試樣品有支原體的污染。
(A)Negative result
螢光顯微鏡下，只觀(guān)察到Vero細胞的細胞核，測試樣品沒(méi)有支原體的污染。
(Positive Result 在Vero細胞核外與細胞表面會(huì )出現藍色螢光小點(diǎn)和絲狀點(diǎn)，表示測試樣品有支原體的污染。
