凍存和復蘇的原則：慢凍快融
當細胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細胞內形成冰晶。
如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內不致產(chǎn)生大的冰晶；相反，結晶就大，大結晶會(huì )造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復蘇過(guò)程應快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。
慢凍程序
1. 標準程序：采用細胞凍存器
當溫度在-25 ℃以上時(shí)， 1~2 ℃/min；
當溫度達-25 ℃以下時(shí)， 5~10 ℃/min；
當溫度達-100℃時(shí)，可迅速放入液氮中。
2. 簡(jiǎn)易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內，紗布袋系以線(xiàn)繩，通過(guò)線(xiàn)繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2 ℃的速度，在40 min內降至液氮表面過(guò)夜，次晨投人液氮中。
3. 傳統程序：冷凍管置于4℃ 10 分鐘→ -20℃ 30 分鐘→ -80℃ 16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽長(cháng)期儲存。
細胞凍存方法
1. 預先配制凍存液
（1）10%DMSO + 細胞生長(cháng)液（20%血清+基礎培養液）
2. 取對數生長(cháng)期細胞，經(jīng)胰酶消化后，加入適量?jì)龃嬉海?用吸管吹打制成細胞懸液（1×106 ~ 5 ×106細胞/ml）。
3. 加入1 ml細胞于凍存管中，密封后標記冷凍細胞名稱(chēng)和冷凍日期。液氮長(cháng)期保存。
保存細胞的復蘇方法
1. 快速解凍
凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1 分鐘內全部融化（不要超過(guò)3 分鐘）。
2. 解凍后的細胞可直接接種到含完全生長(cháng)培養液的細胞培養瓶中直接進(jìn)行培養，24小時(shí)后再用新鮮完全培養液替換舊培養液，以去除DMSO。
3. 如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應先通過(guò)離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含完全生長(cháng)培養液的培養瓶中。
