1. 凍存細胞的復蘇
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應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調至37-37。5度,取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。
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在無(wú)菌臺內將完全培養基加入50ml的小培養瓶?jì)?,約5ml左右,然后用無(wú)菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養并內輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養箱內培養。
2. 傳代:
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貼壁細胞:
對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據經(jīng)驗),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養瓶?jì)?,加入完全培養基后繼續培養或實(shí)驗。
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懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶?jì)?,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入完全培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶?jì)燃尤胪耆囵B基繼續培養。
3. 凍存
將貼壁細胞消化后離心收集,懸浮細胞直接離心收集,以完全培養基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1~2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過(guò)夜。次日保存到液氮中。