細胞培養常規方法

1. 凍存細胞的復蘇

1. 應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調至37-37。5度，取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。

2. 在無(wú)菌臺內將完全培養基加入50ml的小培養瓶?jì)?，約5ml左右，然后用無(wú)菌吸管從凍存管內取出細胞，置培養并內輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養箱內培養。

2. 傳代:

1. 貼壁細胞:

對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據經(jīng)驗)，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細胞收縮變圓或少數脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml完全培養基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養瓶?jì)?，加入完全培養基后繼續培養或實(shí)驗。

2. 懸浮細胞:

一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶?jì)?，加入完全培養基繼續培養，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入完全培養基，輕輕吹勻后，分置其它培養瓶?jì)燃尤胪耆囵B基繼續培養。

3. 凍存 

將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以完全培養基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過(guò)夜。次日保存到液氮中。