是不是細胞污染？是哪種細胞污染？如何識別？
細胞中如果污染**，*常見(jiàn)的有枯草桿菌等革蘭陽(yáng)性菌以及大腸桿菌、假單孢菌等革蘭陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見(jiàn)。培養細胞受**污染后，會(huì )很快出現培養液變混濁，pH 改變。
也有少數培養液肉眼觀(guān)察無(wú)多少改變，只能在鏡下發(fā)現菌體才知污染。所以，每天應仔細觀(guān)察。污染后細胞發(fā)生病理改變，胞內顆粒增多、增粗，*后變圓脫落死亡，造成實(shí)驗失敗和細胞株(系)丟失。
**在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染**的不同，可有不同的外形，培養液一般會(huì )渾濁變黃，對細胞生長(cháng)影響明顯。
如何預防
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仔細檢查一下器皿的**情況，是否在高壓**時(shí)放氣時(shí)間足夠、壓力足夠。
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重點(diǎn)檢查和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話(huà)有可能造成儲存液污染，一定要注意。
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下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象，可在培養液中加相應的***處理。
霉菌污染以后，培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37 度孵箱培養 2-3 天，仍清亮，但出現絮狀雜質(zhì)。鏡下可見(jiàn)呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長(cháng)，但時(shí)間長(cháng)之后，細胞的活力狀態(tài)變差。
用硫酸銅溶液擦拭 CO2 孵箱內，再把水盤(pán)里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B箱的托盤(pán)加入飽和的**磷酸氫二鈉高鹽液體, 可以防止霉菌污染。
CO2 孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時(shí)轉移，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2 月左右），尤其在多雨的季節。
其它培養箱清洗方法是：用 84 液擦洗－清水擦洗－75% 酒精擦洗－紫外燈照。
如何預防
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可在培養基里加 3u/mL 的兩性霉素或制霉菌素或放線(xiàn)菌素 D 或雙抗。
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細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線(xiàn)菌素 D 或雙抗都于事無(wú)補，建議舍棄該污染細胞。
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將環(huán)境徹底**，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，就要注意操作。
上圖是典型的霉菌污染，肉眼看到白色的團塊或白點(diǎn)，鏡下呈絲狀。400 倍圖片如上。
支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。培養液一般會(huì )渾濁。
國內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中*常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去?？捎锰?lè )菌素——獸用支原體病的藥，無(wú)任何**反應。如果用的是 Sigma 公司的，使用時(shí)用 50u g/mL Tylosin 培養液培養 6 天或連續傳兩代即可**支原體污染。如果作為常用的***的話(huà), 建議用 8 ug/mL
一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些**開(kāi)始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。
**生長(cháng)的比較慢，不象**那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點(diǎn)狀物數量非常多，輕微活動(dòng)，細胞雖然可以生長(cháng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會(huì )與細胞爭奪營(yíng)養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞占優(yōu)勢所以不會(huì )影響到細胞的正常生長(cháng)，只有當他們到達一定的數量時(shí)就會(huì )影響到細胞的生長(cháng)，*終形成惡性循環(huán)。
污染的可能原因：配液**問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等等。
關(guān)于培養基的無(wú)菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37 度試培養一段時(shí)間后觀(guān)察。如果沒(méi)有**生長(cháng) 就是操作的問(wèn)題。也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì )影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗結果。
如何預防
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孵箱應定期用三氧機**或者紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱，同時(shí)孵箱內的水應是三蒸水。
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超凈臺、取材、器材、培養液、培養瓶、操作等因素
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超凈臺的風(fēng)機不能過(guò)大，風(fēng)機到 6-8 格。否則也可能能致霉菌污染。
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無(wú)菌室經(jīng)甲醛熏蒸**后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。
