細胞培養常見(jiàn)問(wèn)題的原因及對策
1. 培養液pH值變化太快：
CO2張力不對。培養瓶蓋擰得太緊。NaHCO3緩沖系統緩沖力不足。培養液中鹽濃度不正確。**、酵母或**污染。
按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。（2）改用不依賴(lài)CO2培養液。
松開(kāi)瓶蓋1/4圈。
加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。
在CO2培養環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養液，在大氣培養環(huán)境中培養改用Hank’s鹽配制的培養液。
丟棄培養物或用*****。
2. 培養液出現沉淀，但pH值不變：
用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養基成分沉淀下來(lái)。冰凍保存培養液。
用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后**。
將培養液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。
3. 培養液出現沉淀，同時(shí)pH 發(fā)生變化：
**或**污染。
丟棄培養物或用*****。
4. 培養細胞不貼壁：
胰蛋白酶消化過(guò)度；支原體污染；培養液中無(wú)貼壁因子。
縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。
分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。
5. 懸浮細胞成簇：
培養液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過(guò)度消化使得細胞裂解釋放DNA。
用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。
分離培養物，檢測支原體。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。
用DNase I處理細胞。
6. 原代細胞培養物污染：
原代培養組織在進(jìn)入培養前已污染
培養前用含高濃度***的平衡鹽溶液反復沖洗組織。
7. 培養細胞死亡：
培養箱內無(wú)CO2。培養箱內溫度波動(dòng)太大。細胞凍存或復蘇過(guò)程中損傷。培養液滲透壓不正確。培養液種有毒代謝產(chǎn)物堆積。
檢測培養箱內CO2
檢查培養箱內溫度
取新的保存細胞種
檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動(dòng)物細胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或**都有可能影響培養液滲透壓。
換入新鮮培養液
8. 培養細胞生長(cháng)減慢：
由于更換不同培養液或血清。培養液中一些細胞生長(cháng)必需成分如谷氨酰胺或生長(cháng)因子耗盡或缺乏或已被破壞。培養物中有少量**或**污染。試劑保存不當。
比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長(cháng)實(shí)驗。
增加起始培養細胞濃度。
讓細胞逐漸適應新培養液。
換入新鮮配制培養液。
補加谷氨酰胺或生長(cháng)因子。
用無(wú)***培養液培養，如發(fā)現污染，丟棄培養物?；蛴?****。
血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養液需在2–8℃避光保存。含血清完全培養液在2–8℃保存，并在2周內用完。
接種細胞起始濃度太低，細胞已老化，支原體污染。
增加接種細胞起始濃度。
換用新的保種細胞。
分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。
